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攪拌式多肽合成儀操作流程

更新時間:2025-12-26點擊次數(shù):290
  攪拌式多肽合成儀是一種基于固相多肽合成法(SPPS)的自動化設(shè)備,通過程序控制實現(xiàn)氨基酸的逐個偶聯(lián)、脫保護、洗滌等步驟,最終合成目標(biāo)多肽鏈。
 
  攪拌式多肽合成儀操作流程:
 
  準(zhǔn)備階段:
 
  環(huán)境要求:選擇干燥、清潔、溫度穩(wěn)定的場所(20℃±5℃),避免潮濕、高溫或灰塵干擾。
 
  設(shè)備檢查:確保儀器安裝平穩(wěn),電源電壓、頻率與設(shè)備要求匹配(如壓縮空氣壓力“AIR”表需60-100psi,“N?”表需5-10psi)。檢查溶劑儲液瓶、氣體管道連接是否緊密,防止泄漏。
 
  試劑準(zhǔn)備:準(zhǔn)備高純度氨基酸、活化試劑(如HBTU)、溶劑(DMF、DCM)及樹脂,確保無雜質(zhì)。根據(jù)合成方案稱量試劑,嚴(yán)格按比例混合(如3倍過量氨基酸用于偶聯(lián)反應(yīng))。
 
  樹脂處理:將樹脂加入反應(yīng)器,用DCM溶脹后抽干,再用DMF洗滌去除雜質(zhì)。
 
  合成階段:
 
  輸入序列與參數(shù):輸入多肽序列,設(shè)定反應(yīng)條件(溫度、時間、溶劑比例)。示例:Fmoc脫保護(20%哌啶/DMF,5分鐘×2次);偶聯(lián)反應(yīng)(3倍過量氨基酸,1小時)。
 
  啟動程序:運行設(shè)備自檢程序,校準(zhǔn)溫度、壓力、取液針等參數(shù),確保傳感器精度。打開合成儀電源及壓縮空氣開關(guān),啟動預(yù)設(shè)程序。
 
  自動合成:儀器自動完成脫保護、偶聯(lián)、洗滌循環(huán),全程監(jiān)測反應(yīng)溫度、壓力及pH值。
 
  后處理階段:
 
  裂解:加入裂解液(如TFA/水/三異丙基硅烷=95:2.5:2.5),室溫攪拌2小時,將多肽從樹脂上裂解下來。
 
  純化:過濾除去樹脂,濃縮裂解液后用乙*沉淀粗肽,通過離心、洗滌得到固體產(chǎn)物。使用HPLC純化,去除雜質(zhì)。
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